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　　目的：本研究探讨了蓝光诱导角膜上皮毒性的分子机制。方法：将C57BL/6J小鼠暴露于460 nm蓝光1、2或4周，而人类角膜上皮（HCE）细胞暴露15或30分钟。通过RNA测序及生物信息学分析，研究人员将p53信号通路和铁死亡（ferroptosis）确定为关

　　目的：本研究探讨了蓝光诱导角膜上皮毒性的分子机制。方法：将C57BL/6J小鼠暴露于460 nm蓝光1、2或4周，而人类角膜上皮（HCE）细胞暴露15或30分钟。通过RNA测序及生物信息学分析，研究人员将p53信号通路和铁死亡（ferroptosis）确定为关键通路。采用siRNA进行p53敲低以及使用pifithrin-α（PFT-α）进行药理学抑制，以在体外和体内验证该机制。结果：蓝光暴露导致时间依赖性的角膜上皮破坏、泪膜稳定性降低、炎性细胞浸润增加、K12表达下调以及K10表达上调。蓝光诱导HCE细胞死亡和G1期细胞周期阻滞。铁死亡的特征包括细胞内亚铁离子（Fe

　　）积累、活性氧（ROS）生成、SLC7A11和GPX4表达降低以及COX2表达增加。RNA测序揭示p53通路激活是铁死亡的主要调控因子。p53敲低逆转了蓝光诱导的SLC7A11/GPX4抑制和COX2上调。局部给予PFT-α可减轻角膜上皮损伤，恢复K12表达，抑制K10表达，并使体内铁死亡标志物正常化。结论：蓝光污染通过p53介导的SLC7A11/GPX4轴抑制触发角膜上皮铁死亡。p53的药理学抑制是蓝光相关干眼的一种有前景的治疗策略。

　　随着数字显示设备的普及，蓝光暴露已成为现代视觉生态中的新兴环境压力源。蓝光（400–500 nm）可穿透眼表组织，既往研究主要关注其对视网膜的光化学损伤，而角膜作为直接接触环境光的最外层组织，其光毒性机制尚未充分阐明。干眼症全球患病率高达5–50%，数字设备使用已被确认为重要风险因素。尽管已有研究显示蓝光通过cAMP-PKA-Pax6通路损伤结膜干细胞，但蓝光对构成眼表主要屈光和屏障结构的角膜上皮的直接分子效应仍不明确。铁死亡（ferroptosis）是一种铁依赖性的调节性细胞死亡形式，在多种眼科疾病中发挥关键作用，但蓝光是否通过铁死亡机制损伤角膜上皮尚属未知。p53作为肿瘤抑制蛋白，除调控细胞周期阻滞和凋亡外，近年被证实可调节铁死亡，但其在蓝光相关角膜损伤中的角色仍未探索。本研究旨在阐明蓝光暴露诱导角膜上皮毒性的分子机制，为干眼提供机制导向的治疗策略。

　　研究人员采用C57BL/6J小鼠（7–8周龄雄性）暴露于460 nm蓝光（1000 lux，每日8小时，持续1、2或4周）的体内模型，以及人类角膜上皮（HCE）细胞（CRL-3582，美国典型培养物保藏中心）暴露15或30分钟的体外模型，系统评估了蓝光对角膜上皮的影响。通过RNA测序结合生物信息学分析，鉴定出p53信号通路和铁死亡为关键通路。利用siRNA介导的p53敲低和pifithrin-α（PFT-α）的药理学抑制，在体内外验证了p53调控铁死亡的机制。研究得出以下结论：蓝光污染通过p53介导的SLC7A11/GPX4抗氧化轴抑制，触发角膜上皮铁死亡，导致进行性眼表损伤；p53的药理学抑制是蓝光相关干眼的一种有前景的治疗策略。该论文发表在《Antioxidants》。

　　- 使用RNA测序（Illumina NovaSeq Xplus平台，150 bp双端测序，约4000万reads/样本）结合生物信息学分析（基因本体论GO富集、京都基因与基因组百科全书KEGG通路富集、基因集富集分析GSEA）鉴定关键通路。

　　- 运用p53特异性抑制剂pifithrin-α（PFT-α，500 μM）进行体内药理学干预，每日四次局部滴眼，持续2周。

　　- 通过流式细胞术（CytoFLEX）检测细胞周期分布（碘化丙啶PI染色）、活性氧（ROS）水平（DCFH-DA探针）和细胞活力（CCK-8法）。

　　- 评估眼表完整性：荧光素钠染色及裂隙灯照相、泪膜破裂时间（TBUT）测量、体内共聚焦显微镜（Heidelberg Retina Tomograph III）、光学相干断层扫描（OPTOPROBE系统）及苏木精-伊红（H&E）染色组织学分析。

　　通过小鼠模型，研究人员发现460 nm蓝光暴露导致时间依赖性的角膜上皮荧光素染色增强（提示屏障功能受损）、泪膜破裂时间缩短（泪膜稳定性下降），以及体内共聚焦显微镜下基底上皮和基质中炎性细胞（高反射点状结构）的进行性积聚。免疫印迹证实促炎细胞因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6和肿瘤坏死因子（TNF）-α蛋白水平呈时间依赖性上调。光学相干断层扫描显示中央角膜厚度无显著变化，而H&E染色组织学分析表明，蓝光暴露4周后角膜上皮显著变薄，基底细胞形态不规则。

　　在HCE细胞中，蓝光暴露15或30分钟导致贴壁细胞进行性丧失，CCK-8测定显示细胞活力呈时间依赖性降低。活死染色（钙黄绿素-AM/PI）证实死亡细胞比例增加。流式细胞术分析显示，30分钟蓝光暴露导致G1期细胞积累（G1期细胞周期阻滞），同时qRT-PCR检测到G1期调控因子cyclin D1（CCND1）和cyclin依赖性激酶4（CDK4）的mRNA水平显著降低。

　　qRT-PCR显示，蓝光暴露后角膜特异性角蛋白K12（角膜上皮分化标志物）表达进行性下调，而鳞状化生标志物K10表达进行性上调。FerroOrange染色显示细胞内亚铁离子（Fe2+）显著积累。免疫印迹和qRT-PCR检测到铁死亡关键调节因子：溶质载体家族7成员11（SLC7A11）和谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）蛋白及mRNA水平呈时间依赖性降低，而环氧化酶-2（COX2）表达增加。DCFH-DA荧光染色及流式细胞术证实蓝光暴露后细胞内ROS水平显著升高。

　　RNA测序主成分分析显示对照与蓝光暴露组分离。差异表达分析鉴定出901个显著改变基因（579个上调，322个下调）。GO富集分析显示细胞过程、代谢过程、应激反应及抗氧化活性等类别显著改变。KEGG通路富集分析发现p53信号通路和铁死亡通路显著富集。GSEA确认蓝光暴露样本中p53信号通路呈正向富集。维恩图分析p53通路前导基因与铁死亡相关基因集的交集，鉴定出SLC7A11和HMOX1为共同基因。蛋白质-蛋白质相互作用网络显示p53与铁死亡相关蛋白（包括SLC7A11、GPX4）之间存在广泛相互作用。

　　免疫印迹证实蓝光暴露后p53蛋白水平升高。筛选三种siRNA，si-p53-3实现最高效的p53 mRNA和蛋白敲低。在蓝光暴露条件下，p53敲低显著逆转了蓝光诱导的SLC7A11和GPX4蛋白抑制，并降低了COX2的上调，证实p53激活是蓝光诱导SLC7A11/GPX4轴抑制和铁死亡所必需的。

　　对暴露蓝光2周的小鼠局部给予PFT-α（500 μM，每日四次），与溶剂对照组相比，PFT-α处理显著减少角膜荧光素染色、延长泪膜破裂时间，并减轻体内共聚焦显微镜下炎性细胞浸润。免疫印迹显示PFT-α显著减弱蓝光诱导的IL-1β、IL-6和TNF-α上调。qRT-PCR和免疫印迹均显示PFT-α恢复K12 mRNA和蛋白水平，抑制K10表达。同时，PFT-α处理恢复了SLC7A11和GPX4蛋白表达，并降低了COX2水平，证实p53抑制在体内保护角膜上皮并维持铁死亡标志物正常化。

　　讨论部分指出，本研究首次提供综合证据表明蓝光诱导的角膜上皮铁死亡是干眼病的致病机制，并确定p53介导的SLC7A11/GPX4轴抑制为核心调控通路。研究结果与先前对蓝光结膜损伤的研究互补，表明蓝光通过不同机制影响眼表多个组分。临床意义方面，研究明确日常数字设备使用中常见的蓝光强度可累积性损伤角膜，提示需采取工程干预（如蓝光过滤屏幕和眼镜）、行为改变及公共健康措施。研究局限性包括：1000 lux强度模拟最大显示亮度但未涵盖真实环境变异性；单一波长（460 nm）未完全反映实际光谱；每日8小时暴露可能不代表间歇性使用模式；仅关注短期（4周）结局；未系统评估角膜神经形态；p53上游事件需进一步阐明；HCE细胞系为病毒转化细胞，未来需在原始细胞中验证。最终结论（翻译原文结论部分）：蓝光暴露诱导进行性角膜上皮损伤，其特征为屏障破坏、炎性浸润和上皮变薄。其潜在机制涉及p53介导的铁死亡，通过转录抑制SLC7A11/GPX4抗氧化轴，同时伴有G1期细胞周期阻滞和从K12到K10的病理性角蛋白表达转换。p53的基因沉默或局部PFT-α的药理学抑制通过恢复SLC7A11/GPX4表达、维持角膜上皮特性和眼表完整性，有效减轻蓝光诱导的损伤。这些发现确立了p53介导的铁死亡是蓝光相关眼表疾病的核心机制，并指出p53抑制是预防和治疗与数字设备使用相关的干眼的一种有前景的治疗策略。